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As infecções pelo vírus Influenza A (VIA) representam um grande desafio, tanto na pesquisa quanto na prática, em todo o mundo, não apenas em matrizes, mas também em leitões. Os vírus da gripe são atualmente endémicos em muitas granjas suinícolas, com um quadro clínico muito variável e um diagnóstico muitas vezes complicado por coinfecções. Em muitos casos, a identificação do vírus influenza envolvido na doença requer a detecção do patógeno além da faixa etária clinicamente afetada. A crescente dinâmica na evolução genética dos vírus influenza e a variação em sua infectividade e expressão da doença requer experiência e conhecimento para interpretar os resultados diagnósticos. Nesta primeira parte de três artigos, nos concentraremos nas últimas notícias sobre o vírus e sua abordagem diagnóstica. Na segunda parte detalharemos a doença clínica e as coinfecções e no terceiro artigo apresentaremos uma visão geral das estratégias de controle.
Os vírus da gripe A (VIA) em suínos são vírus de RNA envelopados que pertencem à família Orthomyxoviridae. Uma de suas características é que seu genoma consiste em oito segmentos de genes, cada um dos quais codifica pelo menos uma proteína. Dois dos oito segmentos são responsáveis pelas estruturas de superfície antigênica conhecidas como hemaglutinina (HA) e neuraminidase (NA) (figura 1). Os VIAs são classificados em subtipos com base nessas estruturas e, até o momento, foram identificados dezoito subtipos de HA e onze de NA.
Até 2009 havia principalmente três subtipos circulando em suínos (swIAV), H1avN1, H1huN2 e H3huN2. Naquela época, apenas alguns genótipos distintos, definidos por todos os segmentos do genoma, haviam sido identificados. Esse cenário mudou com a chegada da cepa pandêmica H1pdmN1pdm durante a pandemia de influenza em 2009. Dados recentemente publicados (Henritzi et al. 2020) mostram que existem atualmente 31 genótipos diferentes de swIAV resultantes do rearranjo genético dos oito segmentos entre H1pdmN1pdm e linhagens anteriores de swIAV que circulavam na Europa. Essa vigilância passiva foi realizada em 2.457 granjas em 17 países europeus entre 2015 e 2017 e revelou que o swIAV pode ser detectado nas granjas ao longo do ano, portanto, ao contrário da gripe humana, não é sazonal. Foram encontradas diferenças na distribuição dos subtipos nas diferentes regiões.
Existem vários métodos de diagnóstico para a detecção direta de swIAV. O método e o número de amostras devem ser escolhidos de acordo com a situação da granja. Os swabs nasais são adequados para detectar proteínas da matriz de VIA por PCR. Se positivo com carga viral adequada, a tipagem pode ser feita por RT-PCR específico para HA e NA. Deve-se notar que os animais geralmente excretam o vírus por apenas 5-7 dias após a infecção e o eliminam dos pulmões em cerca de 9 dias. Portanto, o momento da amostragem por métodos individuais (swabs nasais, lavados broncoalveolares ou pulmões) é essencial. Como o quadro clínico geralmente é complicado por infecções secundárias, o swIAV pode não ser mais detectável quando ocorrem os sintomas mais graves. No caso de infecções com vários subtipos de swIAV, nem todos os subtipos envolvidos serão detectados igualmente. Especialmente em granjas com influenza endêmica e sintomas clínicos pouco claros, recomenda-se o uso de métodos de triagem (amostras de esfregaço de úbere, amostras de fluido oral) em diferentes faixas etárias.
Se cinco swabs nasais forem testados em uma amostra agrupada por PCR, praticamente não haverá perda de sensibilidade. Isso pode aumentar a taxa de detecção, pois com os "pools" com mais amostras podem ser processadas com o mesmo esforço. Portanto, o swab nasal continua sendo crucial para o diagnóstico da gripe. A boa qualidade da amostra geralmente permite a cultura. É importante que as amostras sejam enviadas refrigeradas ao laboratório mais rápido possível. Em um surto agudo, as amostras devem ser coletadas de animais que adoeceram recentemente e apresentam febre. Em granjas endemicamente infectadas, a seleção de animais para amostragem deve ser ajustada ao fato de que animais com sintomas típicos, como temperatura elevada, são menos evidentes. A detecção viral precoce em leitões lactentes é muitas vezes possível sem sinais clínicos visíveis. Como os anticorpos maternos protegem contra doenças, mas não contra infecções, os leitões lactentes podem excretá-los e carregá-los para a creche. A mistura de leitões permite uma propagação muito rápida do vírus, portanto, o período imediatamente após o desmame é um bom momento para amostragem. Devem também ser colhidas amostras de animais de grupos etários que apresentem regularmente sinais clínicos (espirros, constipações, tosse, febre, atrasos súbitos). Portanto, o teste transversal, amostrando diferentes faixas etárias ao mesmo tempo, é indicado para obter a melhor visão geral das cepas de swIAV circulantes na granja.
Por se tratar de um método indireto (detecção de anticorpos), um teste de inibição da hemaglutinação (HI) em amostras de soro de animais preferencialmente não vacinados pode indicar que existem outros subtipos envolvidos que não haviam sido detectados diretamente anteriormente. HI é baseado no fato de que os anticorpos inibem o efeito de coagulação do sangue do VIA. Se o soro de um suíno pode prevenir a coagulação do sangue pelas cepas do vírus influenza usadas no teste, isso indica que o suíno desenvolveu anticorpos específicos contra subtipos semelhantes. Portanto, o HI oferece uma vantagem sobre o ELISA, que só pode fornecer informações sobre a Influenza A em geral. No entanto, amostras de soro de leitões até o final da creche muitas vezes não mostram a presença de anticorpos, mesmo que os animais tenham tido contato com o swIAV na creche. A soroconversão pode ser dificultada por anticorpos maternos, que estão nos leitões não apenas de matrizes vacinadas, mas também de matrizes previamente infectadas. Portanto, a coleta de amostras de sangue na transição não é conclusiva, no entanto, amostras de soro pareadas de suínos, leitoas ou matrizes em terminação podem fornecer bons resultados.
Embora os diagnósticos sejam muitas vezes muito trabalhosos, eles são a única maneira de determinar as cepas que circulam na granja e o momento da infecção. Eles são um pré-requisito para implementar as medidas de manejo e protocolos de vacinação corretos.
