Diagnóstico laboratorial: Rotavírus

Existem três grupos principais de rotavírus que causam diarreia em suínos: Rotavírus A, Rotavírus B e Rotavírus C. Cada grupo de vírus é diferente dos outros e requer testes específicos desenvolvidos para eles. A diarreia em suínos frequentemente envolve infecções por múltiplos grupos de rotavírus ao mesmo tempo.

Testes disponíveis:

Patologia macroscópica

• Avalia a presença de estreitamento da parede do intestino delgado que pode sugerir a presença de doença.
• Localização das lesões: jejuno e íleo.
• Prós:
  • Resultados rápidos e econômicos
  • Aplicável a todos os três grupos de rotavírus
• Contras:
  • Não diagnóstico – lesões semelhantes podem ser encontradas em outras doenças, especialmente infecções por coronavírus (gastroenterite transmissível, diarreia epidêmica suína e delta coronavírus suíno)
  • Requer tecidos frescos (<15 min), pois a decomposição altera drasticamente a aparência do intestino delgado
  • Não faz distinção entre diferentes grupos de rotavírus

• Avalia a presença de lesões teciduais (atrofia das vilosidades do intestino delgado) que podem sugerir fortemente a presença de doença.
• Tipos de amostras: tecido do jejuno e íleo.
• Prós:
  • Confirma atrofia das vilosidades sugerindo enterite viral
• Contras:
  • É necessário fixar os tecidos intestinais com formalina em menos de 15 minutos após a morte do animal. O tecido intestinal se decompõe rapidamente

Imuno-histoquímica (IHC)

• Detecta a presença de antígeno viral.
• Tipos de amostras: tecido do jejuno e íleo.
• Prós:
  • Diagnóstico definitivo: pode confirmar a presença do vírus com lesões associadas
• Contras:
  • Atualmente disponível apenas para Rotavírus A e Rotavírus C (não disponível para Rotavírus B)

Reação em cadeia de polimerase (PCR)

• Detecta a presença de uma sequência específica de ácido nucleico viral (RNA)
• Tipos de amostras: tecidos intestinais do jejuno e íleo, esfregaços fecais, fezes.
• Prós:
  • A PCR multiplex pode detectar diferentes grupos de rotavírus, incluindo Rotavírus A, Rotavírus B e Rotavírus C
  • Alta sensibilidade
  • Quantificação por PCR
  • Custo moderado
    • Amostras de fezes ou tecidos podem muitas vezes ser agrupadas para reduzir custos e minimizar a perda de sensibilidade (especialmente no que diz respeito à relevância clínica)
• Contras:

  • Alta sensibilidade – pode confirmar a presença do vírus, mas não a doença (alta prevalência do vírus no ambiente)

Isolamento do vírus

• Isolamento de vírus vivo
• Tipos de amostras: tecidos intestinais do jejuno e íleo, esfregaços fecais, fezes.
• Prós:
  • Isolamento do vírus para uso no desenvolvimento de vacinas (vacinas autógenas)
• Contras:
  • Caro
  • Resultados lentos
  • Atualmente disponível apenas para Rotavírus A e não para Rotavírus B ou Rotavírus C
  • Muitas vezes difícil de cultivar (muitos falsos negativos)
  • A manipulação de amostras do campo para o laboratório pode afetar a sobrevivência do vírus

Ensaio imunoabsorvente enzimático (ELISA)

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipos de amostras: soro.
• Prós:
  • Os animais permanecem positivos durante várias semanas
  • Pode identificar granjas negativas
• Contras:
  • A elevada prevalência do vírus no ambiente resulta numa exposição comum em muitos/maioria dos suínos
  • Requer um teste específico para cada grupo de rotavírus
  • Não há proteção cruzada entre diferentes grupos de rotavírus

Tabela 1. Resumo dos testes aplicáveis ​​em relação aos diferentes grupos de rotavírus.

Interpretação dos resultados:

Patologia macroscópica

• Positivo: Confirmação preliminar da presença de estreitamento intestinal.
• Negativo: Casos iniciais ou leves podem não manifestar lesões intestinais extensas.

Histopatologia

• Positivo: Confirmação da doença, mas não da causa da doença.
• Negativo: Negativo ou lesões não são detectadas se a amostra errada for testada ou feita muito tempo após a infecção.

IHC

• Positivo: O vírus está presente no local da lesão.
• Negativo: Negativo ou o vírus não é detectado se o teste for realizado muito depois da infecção ou se a concentração do vírus for muito baixa (presente apenas por um curto período de tempo).

PCR

• Positivo: Confirmação da presença dos diferentes grupos de rotavírus (A, B e C).
• Negativo: Negativo, o vírus não é detectado se o teste for realizado muito depois da infecção ou devido à seleção ou manuseio incorreto da amostra.

Isolamento do vírus

• Positivo: Confirmação da presença do vírus, mas não da doença.
• Negativo: Negativo, o vírus não é detectado se o teste for realizado muito depois da infecção ou simplesmente não pode crescer devido a outra contaminação ou manuseio inadequado (presente, mas muito difícil de cultivar). Não detecta Rotavírus B ou Rotavírus C.

ELISA

• Positivo: Exposição prévia (> 2-4 semanas) à vacina ou vírus de campo. Nenhuma associação de positividade e doença.
• Negativo:
  • Negativo para vacina ou vírus de campo
  • Infecção muito recente para ser detectada

Caso clínico:

Leitões recém-nascidos com diarreia (aguda ou crônica)

• Coletar amostras fecais de 10 ou mais animais não tratados com diarreia e enviá-las para testes PCR para Rotavírus A, Rotavírus B e Rotavírus C em grupos de 5.
• Necrópsia 1-3 suínos quê morreram recentemente ou que foram eutanasiados com diarreia. Avaliar macroscopicamente o jejuno e o íleo quanto o estreitamento da parede intestinal. Coletar amostras e fixá-las em formalina para histopatologia e IHQ.

Leitões recém-desmamados com diarreia (aguda ou crônica)

• Coletar amostras fecais de 10 ou mais suínos não tratados com diarreia e enviá-las para testes PCR para Rotavírus A, Rotavírus B e Rotavírus C em grupos de 5.
• Necrópsia 1-3 animais que morreram recentemente ou que foram eutanasiados com diarreia. Avaliar macroscopicamente o jejuno e o íleo quanto o estreitamento da parede intestinal. Coletar amostras e fixá-las em formalina para histopatologia e IHQ.