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Haemophilus parasuis (HPS) continua desafiando os produtores de suínos, causando polisserosite fibrinosa, meningite e artrite em seus animais, uma síndrome comumente conhecida como doença de Glässer. É considerada uma das infecções bacterianas mais prevalentes durante a fase de desmame e a medicação regular para controlá-la está se tornando uma preocupação. Deve-se observar que mais de 50% de todas as amostras sistêmicas testadas para HPS PCR no Laboratório de Diagnóstico Veterinário da Iowa State University (ISU VDL) são positivas (Figura 1).
Vacinas contendo células mortas inteiras geralmente protegem apenas contra cepas do mesmo serótipo. HPS é um patógeno muito diverso, e 15 sorotipos foram descritos usando o teste de precipitação em gel de ágar (AGPT) e hemaglutinação indireta (IHA) (Turni e Balckall, 2005). Esses métodos de sorotipagem são baseados em reações entre antígenos de superfície, como polissacarídeos capsulares e anti-soros. Embora a sorotipagem tradicional seja o método mais comumente usado para caracterizar HPS, há um número considerável de isolados que não podem ser sorotipados.
O progresso nos métodos moleculares levou à criação de um PCR de sorotipagem multiplex (Howell et al., 2015; Lacouture et al., 2017). Este PCR utiliza primers baseados em variações dos loci da cápsula, específicos para cada sorotipo, capazes de discriminar 14 dos 15 sorotipos HPS. Nenhum gene de polissacarídeo capsular permitiu a diferenciação entre os sorotipos 5 e 12. Em 2017, Jia et al. propôs um novo esquema de PCR, que continha primers que diferenciavam o sorotipo 5 de 12. No entanto, o primer do sorotipo 12 é baseado em um gene hipotético, portanto, pesquisas adicionais são necessárias.
A comparação entre PCR de sorotipagem e IHA mostrou que ambas as técnicas tiveram os mesmos resultados para 88% dos isolados de HPS analisados. As diferenças observadas podem ser explicadas por complicações com o método IHA. A diferença mais notável é que o número de cepas que não podem ser tipadas (cepas que não podem ser sorotipadas pelo uso de anti-soros) foi significativamente reduzido Howell et al., 2015; Lacouture et al., 2017). A sorotipagem PCR foi otimizada e agora é realizada na Iowa State University Veterinary Diagnostic Laboratory.
Quando um grupo de 216 cepas de HPS isoladas de amostras de suínos enviadas para o ISU VDL foram analisadas, apenas três isolados (0,5%) não foram tipados por PCR de sorotipagem, confirmando uma redução significativa em relação aos métodos convencionais (15 -41%). Os sorotipos 4 (24%), 7 (26,7%), 1 (14,8%), 2 (13,4%), 5/12 (13%) e 13 (10,2%) foram os mais identificados, seguidos dos sorotipos 14 (5,6%) ) e 6 (0,9%) (Figura 2). Esses sorotipos também foram comumente identificados em campo nos Estados Unidos, Canadá, Europa e China.
A maioria dos isolados de HPS nesta coleção foram obtidos de suínos doentes afetados por pneumonia e polisserosite. O local de isolamento da SHP foi principalmente pulmonar (Figura 2), seguido por locais sistêmicos como pericárdio (21%), pleura (7%), articulação (5%), meninge (3,7%), peritônio (1,4%) e fibrina (0,5%). Esse fato sugere fortemente que esses isolados eram virulentos, pois eram capazes de resistir ao soro e à fagocitose, ambos reconhecidos como mecanismos de virulência em HPS (Cerda-Cuellar e Aragón, 2008; Olvera et al., 2009). Mesmo os sorotipos 6 e 7, previamente classificados como não virulentos pelo esquema Kielstein-Rapp-Grabrielson (Kielstein e Rapp-Gabrielson, 1992), foram isolados de sítios sistêmicos. O HPS pode ser isolado dos pulmões de animais saudáveis e co-infecções são comuns. Portanto, a presença de outras cepas potencialmente virulentas infectando o mesmo animal deve ser considerada.
Quando um subconjunto de 216 cepas de HPS isoladas de amostras suínas submetidas a ISU VDL foram analisadas, apenas três (0,5%) não foram identificados pela sorotipagem de PCR, o que confirma uma redução importante quando comparada aos métodos convencionais (15-41%). Os sorotipos 4 (24%), 7 (26,7%), 1 (14,8%), 2 (13,4%), 5/12 (13%) e 13 (10,2%) foram os mais recorrentes, seguidos pelos sorotipos 14 (5,6 %) e 6 (0,9%) (Figura 2). Esses sorotipos também foram comumente identificados em campo nos Estados Unidos, Canadá, Europa e China.
O controle do HPS requer uma abordagem multifacetada. O primeiro passo é caracterizar os isolados encontrados em suínos doentes. O monitoramento da presença de sorotipos HPS nas granjas é essencial para o controle da doença. A sorotipagem PCR e VtaA PCR podem ser ferramentas úteis, em particular, para a seleção de sorotipos virulentos a serem incluídos em vacinas autógenas, para melhorar o gerenciamento do fluxo de suínos misturando origens diferentes com o mesmo sorotipo e para prevenir a introdução de suínos com cepas de HPS potencialmente virulento em granjas livres da doença.
