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Após a validação visual, discutida no artigo anterior desta série de artigos sobre biosseguridade no transporte de animais, continuamos com a validação microbiológica desse processo.
Validação microbiológica
É um sistema usado para avaliar o procedimento de limpeza e desinfecção do transporte, mas não para avaliar a condição de um caminhão antes do carregamento, pois o principal problema é o tempo necessário para obter as informações (incubação da amostra e resultados), cerca de 48-72 h, e certamente o caminhão já terá realizado o transporte.
Na validação microbiológica, o objetivo principal é a detecção de enterobacteriaceae (bactérias gram negativas que fazem parte da microbiota intestinal). Essas Enterobacteriaceae indicarão a presença ou ausência de matéria orgânica após a limpeza e desinfecção do transporte. Utiliza-se este método e não PCRs específicos para patógenos suínos (PRRS, PED, etc.), porque o PCR indica apenas a presença de material genético, mas nunca se o patógeno for viável e capaz de infectar.
Para a verificação microbiológica do transporte, é importante padronizar a coleta de amostras (sempre feita da mesma maneira). Isso pode ser feito com suabes ou placas RODAC®, mas devido ao volume de superfície de um caminhão, é melhor aumentar a superfície amostrada usando toalhetes ou esponjas especiais (Chiffonettes® / Sodi-box®) (foto 1). Normalmente são coletadas duas amostras por andar do reboque, uma no elevador, uma na cabine e outra nas caixas laterais (foto 2). Isso envolve de 7 a 9 amostras por transporte (dependendo do número de andares no caminhão). A mesma quantidade de superfície (cm²) de cada ponto deve sempre ser amostrada e essa superfície deve ser comunicada ao laboratório para fornecer os resultados em UFC/cm².
Avaliação dos resultados: Não há nada descrito sobre qual concentração de enterobactérias seria correta para determinar um transporte "adequado" ou "não adequado" para uma carga de animais. No entanto, existem referências na indústria de alimentos: uma superfície "adequada" é aquela que possui uma carga de 0 a 10 enterobactérias/cm². A partir deste ponto de referência, cada empresa deve determinar o ponto de corte aceitável.
Detecção de trifosfato de adenosina (ATP)
Devido à limitação temporal da cultura microbiológica para obtenção de resultados, existem outras ferramentas no mercado para validação de limpeza e desinfecção, originárias da indústria de alimentos, que podem ser utilizadas na caso de transporte de suínos combinado com a microbiologia. Uma dessas ferramentas é a detecção de trifosfato de adenosina (ATP). O ATP é um componente presente nas fezes, detritos orgânicos, alimentos, bactérias, protozoários, parasitas, leveduras e fungos. No entanto, ele não serve para detectar vírus. Na indústria de alimentos, a detecção de ATP nas superfícies de trabalho é usada como controle de qualidade para limpeza e desinfecção. É um teste rápido (resulta em segundos), fácil de usar pelos operadores, mas é preciso ter cuidado com a interpretação dos resultados, pois é um teste muito sensível. A amostragem do transporte é realizada nos pontos de controle mencionados acima (foto 2), mas com um cotonete que já contém um agente umectante e a enzima luciferase (ativada com a presença de ATP). Uma superfície de 10 cm x 10 cm é amostrada em cada ponto de controle. Usando um luminômetro (foto 3), a bioluminescência do suabe é lida e obtemos resultados em RLUs (unidades de luz relativa).
Avaliação dos resultados: assim como no teste microbiológico, os limites críticos devem ser estabelecidos para indicar quais valores podem ser considerados corretos. Na indústria de alimentos, esses valores podem variar dependendo da superfície amostrada e do produto produzido. Em um estudo no Canadá, a eficácia do protocolo de limpeza e desinfecção do transporte de suínos foi avaliada pelo método de bioluminescência ATP, e os seguintes valores críticos foram estabelecidos: adequado, abaixo de 430 RLU/100 cm², com risco de contaminação entre 430 e 850 RLU/100 cm² e, com alto risco, valores acima de 850 RLU/100 cm² (esses valores são apenas a título de exemplo).
Ao avaliar os resultados, a coleta de amostras na lavadora e após a limpeza e desinfecção deve ser levada em consideração, pois, como mencionado anteriormente, é um método muito sensível e a contaminação ambiental pode aumentar os valores positivos.
Um investimento inicial deve ser feito para o luminômetro, mas o custo de cada amostragem não é alto (aproximadamente 2 euros/suabe). Recomenda-se recalibrar o dispositivo de leitura (uma amostra pode ser usada com o suabe dentro de uma seringa estéril ou de um tubo "vacutainer®" estéril.
A indústria suína está cada vez mais consciente de que deve haver protocolos para os diferentes procedimentos que realizamos nas granjas e no transporte de animais e que esses protocolos devem ser descritos. Porém, às vezes esquecemos o ponto final e mais importante, a validação do protocolo para saber se ele realmente funciona (ou seja, controle de qualidade).
